Navegando por Autor "Duarte, Keila Maria Roncato"
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Item A simple method for DNA isolation from Xanthomonas spp.(2000) Gomes, Luiz Humberto; Duarte, Keila Maria Roncato; Andrino, Felipe Gabriel; Tavares, Flavio Cesar AlmeidaA simple DNA isolation method was developed with routine chemicals that yields high quality and integrity preparations when compared to some of the most well known protocols. The method described does not require the use of lysing enzymes, water bath and the DNA was obtained within 40 minutes The amount of nucleic acid extracted (measured in terms of absorbancy at 260 nm) from strains of Xanthomonas spp., Pseudomonas spp. and Erwinia spp. was two to five times higher than that of the most commonly used method. Foi desenvolvido um método simplificado de isolamento de DNA utilizando substâncias de uso rotineiro facilitando a metodologia e obtendo-se DNA de alta qualidade e integridade quando comparado com os métodos tradicionais. O método descrito não utiliza enzimas líticas, nem banho-maria, e o DNA é obtido em 40 minutos. As quantificações dos DNAs extraídos (medido em D.O. a 260 nm) das dez linhagens de Xanthomonas spp., uma de Pseudomonas spp. e outra de Erwinia spp. mostraram-se de duas a cinco vezes maiores que os métodos conhecidos e suas integridades, testadas em RAPD, apresentaram-se satisfatórias.Item A vector carrying the GFP gene (Green fluorescent protein) as a yeast marker for fermentation processes(2000) Gomes, Luiz Humberto; Duarte, Keila Maria Roncato; Andrino, Felipe Gabriel; Giacomelli, Ana Maria Brancalion; Tavares, Flavio Cesar AlmeidaContaminant yeasts spoil pure culture fermentations and cause great losses in quality and product yields. They can be detected by a variety of methods although none being so efficient for early detection of contaminant yeast cells that appear at low frequency. Pure cultures bearing genetic markers can ease the direct identification of cells and colonies among contaminants. Fast and easy detection are desired and morphological markers would even help the direct visualization of marked pure cultures among contaminants. The GFP gene for green fluorescent protein of Aquorea victoria, proved to be a very efficient marker to visualize transformed cells in mixed populations and tissues. To test this marker in the study of contaminated yeast fermentations, the GFP gene was used to construct a vector under the control of the ADH2 promoter (pYGFP3). Since ADH2 is repressed by glucose the expression of the protein would not interfere in the course of fermentation. The transformed yeasts with the vector pYGFP3 showed high stability and high bioluminescence to permit identification of marked cells among a mixed population of cells. The vector opens the possibility to conduct further studies aiming to develop an efficient method for early detection of spoilage yeasts in industrial fermentative processes. Leveduras contaminantes podem causar grandes perdas em processos fermentativos quando infectam culturas puras e degradam a qualidade do produto final. Estas leveduras podem ser detectadas por diversos métodos mas nenhum deles oferece resultados com a exatidão e precisão necessárias, quando os contaminantes estão em baixa freqüência. Culturas puras contendo um gene marcador podem ser utilizadas para a direta identificação de células e colônias contaminantes. Detecção rápida e fácil é desejada e marcadores morfológicos podem auxiliar na visualização da cultura marcada. O gene da GFP (green fluorescent protein) extraído da Aequorea victoria mostrou-se eficiente para marcação de células, oferecendo ainda uma fácil visualização das populações e tecidos marcados. Para testar este marcador no estudo de leveduras contaminantes, o gene GFP foi usado para construir um vetor, sob o controle do promotor de ADH2, que é reprimido por glicose, não interferindo assim em nenhuma etapa do processo. A inserção do vetor com a GFP (pYGFP3) em leveduras foi um sucesso, demonstrando alta estabilidade e oferecendo com certeza, um novo método com alta eficiência para o controle de contaminantes em processos fermentativos além de servir como marcador destinado a proteção industrial do material genético.Item Environmental infestation and rickettsial infection in ticks in an area endemic for Brazilian spotted fever(2013) Brites-Neto, José; Nieri-Bastos, Fernanda Aparecida; Brasil, Jardel; Duarte, Keila Maria Roncato; Martins, Thiago Fernandes; Veríssimo, Cecília José; Barbieri, Amália Regina Mar; Labruna, Marcelo BahiaBrazilian spotted fever (BSF), caused by Rickettsia rickettsii, is endemic in the municipality of Americana, southeastern Brazil, where the disease is transmitted by the tickAmblyomma cajennense. This study evaluated the tick fauna and rickettsial infection in free-living ticks that were captured monthly using dry ice traps in areas endemic for BSF in Americana, from July 2009 to June 2010. Two tick species were captured: A. cajennense (6,122 larvae; 4,265 nymphs; 2,355 adults) and Amblyomma dubitatum(7,814 larvae; 3,364 nymphs; 1,193 adults). The immature stages of A. cajennense and A. dubitatum had similar distribution through the 12-month period, with larvae of both species collected in highest numbers between April and July, and nymphs between June and October. The highest numbers of A. cajennense adults were collected between October and December, whereas A. dubitatum adults were collected in relatively similar numbers throughout the 12-month period. Rickettsial infection was evaluated by means of PCR in 1,157 A. cajennense and 1,040 A. dubitatum ticks; only 41 (3.9%) A. dubitatum were found to be infected byRickettsia bellii. The present study showed that the areas of Americana that are endemic for BSF are characterized by high environmental burdens of A. cajennense and A. dubitatum. A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma antropozoonose endêmica no município de Americana/SP, causada pela bactéria Rickettsia rickettsii e transmitida pelo carrapato Amblyomma cajennense. Este estudo avaliou a fauna de carrapatos e a infecção por riquétsias em carrapatos de vida livre capturados mensalmente com armadilhas de CO2, em áreas de risco para FMB de Americana, de julho de 2009 a junho de 2010. Duas espécies foram capturadas, A. cajennense(6.122 larvas; 4.265 ninfas; 2.355 adultos) e Amblyomma dubitatum (7.814 larvas; 3.364 ninfas; 1.193 adultos). Os estágios imaturos de A. cajennense e A. dubitatumapresentaram uma distribuição anual semelhante, com larvas de ambas as espécies sendo coletadas em maior número no período de abril a julho e ninfas de junho a outubro. Maior número de adultos de A. cajennense foi coletado de outubro a dezembro, enquanto que os adultos de A. dubitatumforam coletados em número relativamente semelhante durante todo o ano. A infecção por Rickettsia foi avaliada pela PCR em 1157 carrapatos A. cajennense e 1040 A. dubitatum, com apenas 41 (3,9%) A. dubitatum infectados comRickettsia bellii. Este estudo demonstrou que as áreas de risco para FMB de Americana são caracterizadas por elevadas infestações ambientais de A. cajennense e A. dubitatum.Item Identificação do vírus do mosaico do tomateiro (ToMV) Tobamovirus, por meio de anticorpos monoclonais(2002) Duarte, Keila Maria Roncato; Gomes, Luiz Humberto; Andrino, Felipe Gabriel; Leal Jr., Gildemberg Amorin; Silva, Fabio Henrique Bicudo da; Paschoal, Jonas Augusto Rizzato; Giacomelli, Ana Maria Brancalion; Tavares, Flavio Cesar AlmeidaTomato is a highly important crop for the world economy, and very susceptible to virus diseases, among them the tomato mosaic tobamovirus (ToMV), which causes light and dark green mosaic in the leaves, decreases yield, among other symptoms. With the aim of early identifying ToMV in biological material, harvested from crop fields, monoclonal antibodies (MAbs) were produced against ToMV. The MAb 10.H1 tested through PTA-ELISA (Plate Trapped Antigen--Enzyme-Linked immunosorbent assay), does not cross-react with TMV (tobacco mosaic tobamovirus) or with proteins extracted from plant sap. The MAb was able to identify ToMV from infected plants. The ToMV was isolated, purified and used to re-inoculate tobacco and tomato plants to confirm the symptoms. In immunoblotting assays the MAb recognizes only the band corresponding to the coat protein of the ToMV (17.5 kDa). The MAb 10.H1 opens the possibility to identify ToMV in tomato seedlings avoiding its dissemination in cropped fields. O tomateiro é uma olerícola de grande importância econômica e uma das mais suscetíveis a viroses, dentre as quais, a causada pelo vírus do mosaico do tomateiro (ToMV), gênero Tobamovirus, que tem como sintomas mosaico verde claro-escuro nas folhas, afilamento dos folíolos e diminuição da produção, entre outros sintomas. Visando a identificação do ToMV, foram produzidos anticorpos monoclonais (MAbs), testados através de PTA- ELISA ("plate trapped antigen- enzyme linked immunoassay"). O MAb (10.H1) foi utilizado para avaliar a capacidade de identificação do ToMV em testes no campo em plantas de tomate infectadas. O MAb não apresentou reação cruzada com TMV (tobamovirus do mosaico do tabaco) nem com extrato de plantas sadias. O ToMV das amostras foi isolado, purificado e re-inoculado em plantas de tomateiro e de tabaco, para confirmação dos sintomas. Em "immunobloting" o MAb 10.H1 reconheceu somente a proteína referente à capa protéica do ToMV (de 17,5 kDa). A especificidade do MAb 10.H1 pode permitir o diagnóstico precoce desta doença na fase de plântulas, ainda em casa de vegetação, evitando assim a disseminação desta virose no campo.Item Management and control of parasites on dairy farms in northwestern region of São Paulo state(2016) Veríssimo, Cecília José; Vasques, Flávia; Duarte, Keila Maria Roncato; Paulino, Valdinei Tadeu; Ambrósio, Luis AlbertoA bovinocultura leiteira é de extrema importância econômica e social em todas as regiões brasileiras. Os parasitas podem reduzir a produção leiteira, especialmente o carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Este trabalho consistiu em um questionário respondido por 40 produtores de leite da região noroeste do Estado de São Paulo, com o objetivo de saber como os produtores controlam carrapatos e outros parasitas. Grande parte deles não conhecia o ciclo biológico do carrapato do boi nem o controle estragégico e o teste de eficácia de carrapaticidas. A maioria (87,5%) controlava o carrapato com alta frequência, sem critérios técnicos e cuidados na aplicação do carrapaticida. A aspersão foi o modo de aplicação mais usado (95%) e endectocidas eram utilizados por 45%. Tristeza parasitária bovina foi o prejuízo mais associado ao carrapato (87,5%), seguido de perto pela bicheira (77,5%). No entanto, 65% estavam satisfeitos com o controle do carrapato. A maioria (82,5%) criava gado mestiço. Em relação ao controle de outros parasitas, todos vermifugavam seus animais pelo menos duas vezes por ano; 65% deles controlava a mosca-do-chifre; 40% têm problemas com bicheira. Os entrevistados, de forma geral, tinham bom nível educacional, e as fazendas geralmente exibiam alto grau de tecnologia em produção de leite a pasto, porque metade delas recebia assistência técnica constante de um programa estatal que incentiva a produção leiteira sustentável.Item Métodos moleculares em microbiologia de alimentos(Editora MV Valero, 2011-01) Castelani, Lívia; Duarte, Keila Maria RoncatoAs técnicas moleculares constituem-se hoje em ferramentas de alto valor para identificação de patógenos em alimentos, sejam quaisquer forem suas origens. Nesta revisão estão listados a maioria dos testes moleculares utilizados em microbiologia de alimentos, com exemplos de uso. A aplicação de técnicas mais eficazes permite que erros na identificação e conseqüentemente no tratamento do paciente e erradicação do patógeno sejam cada vez menos freqüentes, melhorando a saúde tanto dos animais de produção como da população, ambos acometidos por infecções alimentares.Item Qualidade da carne bovina: processo de abate e contaminação causada por Escherichia coli(Editora MV Valero, 2015-09-17) Pessoa, Fernanda Ferreira; Duarte, Keila Maria RoncatoOutbreaks of disseminated diseases caused by food contamination, in this case, meat it is a great concern for the food industry and the organs of Public Health. The aim of this work was to show that today's food, significantly influences the health of individuals and the population, playing a crucial role in the maintenance and prevention of several diseases, as well as the existence of the bacterium Escherichia coli in food, carrying diseases transmissible to humans and reducing consumer confidence in relation to health. Today a quality product is one that fits perfectly in a reliable, affordable, safe, hygienic and on time, customer needs. We must clearly that the risk of meat infection is great and some precautions should be taken from farm raising to product marketing.Item Resíduos de anabolizantes na produção animal: importância e métodos de detecção(2002) Duarte, Keila Maria Roncato; Silva, Fabiana Maria Siqueira Mariano da; Meirelles, FerreiraWith the development of the pharmaceutical industry, and consequently appearance of new substances which promote animal growth, the agricultural sector needs technologies more and more efficient and sensitive to detect possible residues left by this vast number of anabolic substances, mainly steroids with estrogenic, androgenic and progesterogenics activities. Such substances, when present in meat, fat, and eggs among others, can be detected and quantified by a series of methods, among the ones which we described the chromatographic methods, based mainly on gaseous chromatography coupled to the mass espectrometry (CG-MS), high performance liquid chromatography (HPLC), thin layer chromatography (HPTLC) and the immunological methods, as radioimmunoassay (RIA) and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). These methods have as advantages the high number of samples that can be analyzed by period of time, toghether with high sensibility and accuracy to detect anabolic residues. Com o desenvolvimento da indústria farmacêutica e o conseqüente surgimento de novas substâncias promotoras do crescimento animal, o setor agropecuário necessita de tecnologias cada vez mais eficientes e sensíveis para detectar possíveis resíduos deixados por este vasto número de substâncias anabolizantes, principalmente esteróides com atividades estrogênicas, androgênicas e progestogênicas. Tais substâncias, quando presentes na carne, gordura, ovos, entre outros, podem ser detectadas e quantificadas por uma série de métodos, dentre os quais, descrevemos os cromatográficos, baseados principalmente em cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (CG-EM), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), cromatografia em camada delgada de alta eficiência (CCDAE) e os métodos imunológicos, como radioomunoensaio (RIA) e ensaio imunoenzimático (ELISA). Estes métodos têm como vantagens o elevado número de amostras que podem ser analisadas por período de tempo, aliadas à alta sensibilidade na detecção de resíduos.Item Tick-borne infections in human and animal population worldwide(Veterinary World, 2015-03) Brites-Neto, José; Duarte, Keila Maria Roncato; Martins, Thiago FernandesThe abundance and activity of ectoparasites and its hosts are affected by various abiotic factors, such as climate and other organisms (predators, pathogens and competitors) presenting thus multiples forms of association (obligate to facultative, permanent to intermittent and superficial to subcutaneous) developed during long co-evolving processes. Ticks are ectoparasites widespread globally and its eco epidemiology are closely related to the environmental conditions. They are obligatory hematophagous ectoparasites and responsible as vectors or reservoirs at the transmission of pathogenic fungi, protozoa, viruses, rickettsia and others bacteria during their feeding process on the hosts. Ticks constitute the second vector group that transmit the major number of pathogens to humans and play a role primary for animals in the process of diseases transmission. Many studies on bioecology of ticks, considering the information related to their population dynamics, to the host and the environment, comes possible the application and efficiency of tick control measures in the prevention programs of vector-borne diseases. In this review were considered some taxonomic, morphological, epidemiological and clinical fundamental aspects related to the tick-borne infections that affect human and animal populations.Item Vigilância Epidemiológica da FMB na Região Hidrográfica de Americana(2010) Brites-Neto, José; Nieri-Bastos, Fernanda Aparecida; Brasil, Jardel; Duarte, Keila Maria Roncato; Veríssimo, Cecília José; Labruna, Marcelo BahiaForam apresentados dados sobre o monitoramento ativo e atual situação diagnóstica da Febre Maculosa Brasileira (FMB), em Americana, São Paulo, Brasil, do ponto de vista eco-epidemiológico. O aprimoramento da vigilância sindrômica, em sincronia com a vigilância epidemiológica, aumentou a suspeição de casos e gerou uma maior atividade de investigações de LPIs (Locais Prováveis de Infecção) e classificação das áreas de risco. A vigilância laboratorial estabelecida pelo rastreamento da infecção por rickéttsias do grupo da FMB em carrapatos coletados nas pesquisas acarológicas permitiu uma melhor definição das áreas de transmissão existentes no município.Item Welfare indicators for laying Japanese quails caged at different densities(2018) SOARES, DANIELA F.; PIZZOLANTE, CARLA C.; Duarte, Keila Maria Roncato; MORAES, JOSÉ EVANDRO DE; BUDIÑO, FÁBIO E.L.; SOARES, WEBER V.B.; KAKIMOTO, SÉRGIO K.Abstract In the way to reduce costs in the poultry production, high densities of birds are adopted in the production systems. Such high densities can lead to an inappropriate environment, compromising the welfare and decreasing the animal performance. In this work we aimed to evaluate the effects of different densities on the productive yield, egg quality and immunological aspects of Japanese quails. It was used 816 Japanese quails, during egg production phase, in a random design, with four treatments (121.43 cm2/bird; 106.25 cm2/bird; 94.44 cm2/bird and 85.00 cm2/bird) with six repetitions each. Results indicate density did not interfere on egg quality and all treatments can be considered excellent, once the Haugh Unit was 88.03. Therefore, higher densities decline the yield, decreasing the eggs weight (10.35 g), the laying percentage (88%), egg mass (9.16 g) and the week average feed consumption (157.35 g). IgY values were higher at smaller cage density, suggesting birds in this condition presented better immunological condition, related to welfare and stress factors, all linked to immunoglobulins IgY.